Μοριακός Ελέγχος Θρομβοφιλίας
Ο όρος θρομβοφιλία χρησιμοποιείται για να περιγράψει μια προδιάθεση για θρόμβωση των αρτηριών ή των φλεβών. Τόσο η φλεβική όσο και η αρτηριακή θρόμβωση αποτελούν πολύπλοκες νοσολογικές οντότητες, όπου διαφορετικοί παθοφυσιολογικοί μηχανισμοί συνεισφέρουν στην εκδήλωση της νόσου (π.χ αρτηριακή υπέρταση, ελαττωμένη ροή, φλεγμονή, αθηρωμάτωση). Παρόλα αυτά, επειδή η παθογένεση της αρτηριακής διαφέρει από αυτή της φλεβικής θρόμβωσης είθισται να τις θεωρούμε δυο ξεχωριστές νοσολογικές οντότητες.
Τα τελευταία 35 χρόνια έχουν αναγνωριστεί πολλοί γενετικοί προδιαθεσικοί παράγοντες για φλεβική θρόμβωση, με τη βοήθεια οικογενειακών μελετών (έλλειψη AT, PC, PS αντίσταση στη δράση της ενεργοποιημένης PC με ή χωρίς τη μετάλλαξη V Leiden ή με πληθυσμιακές μελέτες ασθενών-μαρτύρων (μετάλλαξη του γονιδίου της προθρομβίνης II G20210A).
-
Ανίχνευση της κύριας μετάλλαξης του γονιδίου της ομοκυστείνης
MTHFR C677TΑνίχνευση της κύριας μετάλλαξης του γονιδίου της ομοκυστείνης - MTHFR C677T
Φυσιολογία
Η ομοκυστείνη είναι ένα σουλφυδρυλικό αμινοξύ, που σχηματίζεται από την ενδοκυττάρια απομεθυλίωση της μεθειονίνης της τροφής. Το ένζυμο MTHFR περιορίζει τη συγκέντρωση της ομοκυστείνης στο αίμα, εμποδίζοντας έτσι την τοξική της δράση προς το ενδοθηλιακό τοίχωμα των αγγείων. Η μεταλλαγμένη μορφή του ενζύμου, που προκύπτει από αντικατάσταση της θυμίνης από κυτοσίνη στη θέση 677, προκαλεί αύξηση της ομοκυστείνης στο αίμα και αποτελεί προδιαθεσικό παράγοντα θρομβοφιλίας.Επιδημιολογικά δεδομένα
Περίπου 5-15% του πληθυσμού είναι ομόζυγο για τη μετάλλαξη αυτή. Οι ομοζυγώτες έχουν αυξημένο κίνδυνο φλεβικής θρόμβωσης και αγγειοπάθειας του πλακούντα.Βιολογικό υλικό
Περιφερικό αίμα σε στείρο σωληνάριο γενικής με αντιπηκτικό EDTA.Εργαστηριακή διερεύνηση
Γίνεται απομόνωση DNA από περιφερικό αίμα με EDTA και ακολουθεί ενίσχυση του επιθυμητού γονιδίου MTHFR με αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) χρησιμοποιώντας Taq πολυμεράση και βιοτινυλιωμένους εκκινητές. Το ενισχυμένο προϊόν, μεγέθους 223 βάσεων, αφού επιβεβαιώνεται με ηλεκτροφόρηση σε πηκτή αγαρόζης, υβριδοποιείται με ειδικά ολιγονουκλεοτίδια για το μεταλλαγμένο αλληλόμορφο και η ύπαρξή ή μη της μετάλλαξης MTHFR C677T ανιχνεύεται με τη χρήση χρωμοφόρων ουσιών.Αποτελέσματα
Τα αποτελέσματα είναι έτοιμα σε 5 εργάσιμες ημέρες. -
Ανίχνευση της κύριας μετάλλαξης του παράγοντα πήξης του αίματος V
FV-Leiden G1691AΑνίχνευση της κύριας μετάλλαξης του παράγοντα πήξης του αίματος V - FV-Leiden G1691A
Επιδημιολογικά δεδομένα
Περίπου 1 στους 7 Έλληνες πάσχει από θρομβοφιλία. Η σημειακή μετάλλαξη FV-Leiden (G1691Α ή R506Q) αποτελεί τον κυριότερο γενετικό παράγοντα θρομβοφιλίας στο γενικό πληθυσμό. Το μεταλλαγμένο γονίδιο ανακαλύφθηκε το 1994. Βρίσκεται στο 20% των ιδιοπαθών φλεβικών θρομβώσεων και στο 60% των φλεβικών θρομβώσεων στις έγκυες γυναίκες. Η ανίχνευσή του ενδείκνυται στις παρακάτω περιπτώσεις:- φλεβική θρόμβωση σε ηλικία < 50 ετών
- γυναίκες πριν πάρουν αντισυλληπτικά ή ορμονικά σκευάσματα
- ασθενείς ανεξαρτήτου ηλικίας με ιστορικό θρόμβωσης
- μέλη οικογένειας ατόμου με ανίχνευση FV-Leiden
- γυναίκες με ιστορικό επαναλαμβανόμενων αποβολών, αποκόλληση πλακούντα, ΔΕΠ, τοξιναιμία, ενδομήτριος θάνατος, ελλειποβαρή νεογνά, προωρότητα, σύνδρομο πολυκυστικών ωοθηκών
Βιολογικό υλικό
Περιφερικό αίμα σε στείρο σωληνάριο γενικής με αντιπηκτικό EDTA.Εργαστηριακή διερεύνηση
Γίνεται απομόνωση DNA από περιφερικό αίμα με EDTA και ακολουθεί ενίσχυση του επιθυμητού γονιδίου του παράγοντα V με αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) χρησιμοποιώντας Taq πολυμεράση και βιοτινυλιωμένους εκκινητές. Το ενισχυμένο προϊόν, μεγέθους 173 βάσεων, αφού επιβεβαιώνεται με ηλεκτροφόρηση σε πηκτή αγαρόζης, υβριδοποιείται με ειδικά ολιγονουκλεοτίδια για το μεταλλαγμένο αλληλόμορφο και η ύπαρξή ή μη της μετάλλαξης FV G1691A (Leiden) ανιχνεύεται με τη χρήση χρωμοφόρων ουσιών.Αποτελέσματα
Τα αποτελέσματα είναι έτοιμα σε 5 εργάσιμες ημέρες. -
Ανίχνευση της κύριας μετάλλαξης της προθρομβίνης
G20210AΑνίχνευση της κύριας μετάλλαξης της προθρομβίνης - G20210A
Φυσιολογία
Η 20210Α μετάλλαξη στο γονίδιο της προθρομβίνης περιγράφηκε από τους Poort et al το 1996. Μελέτες οικογενειών με τη μετάλλαξη 20210Α έδειξαν ότι υπάρχει στενή σύνδεση μεταξύ ενός γονιδιακού τόπου που καθορίζει τα επίπεδα της προθρομβίνης και της μετάλλαξης 20210Α (Soria et al, 2000). Τα αυξημένα επίπεδα της προθρομβίνης στο πλάσμα έχουν σαν αποτέλεσμα θρόμβους με λεπτότερα ινίδια ινικής, οι οποίοι θα είναι πιο ανθεκτικοί στην ινωδόλυση (Wolberg et al, 2003).Επιδημιολογικά δεδομένα
Η ετεροζυγωτία στο αλλήλόμορφο 20210Α αυξάνει τον κίνδυνο για φλεβική θρόμβωση, περίπου 3 φορές, ενώ αλληλεπιδρά και με άλλους παράγοντες (π.χ κάπνισμα) και αυξάνει τον κίνδυνο για αρτηριακή θρόμβωση (Mc Glennen et al, 2002). Ο έλεγχος της μετάλλαξης κρίνεται απαραίτητος πριν δοθούν αντισυλληπτικά. Όσον αφορά στις καθ΄έξιν αποβολές, υπάρχουν δεδομένα από μελέτες που δείχνουν ότι υπάρχει συσχέτιση μεταξύ των καθ΄έξιν αποβολών πριν τη 13η εβδομάδα ή πριν την 25η εβδομάδα και της μετάλλαξης 20210Α. Η συσχέτιση είναι σημαντική όταν οι ασθενείς έχουν δυο ή περισσότερες αποβολές.Βιολογικό υλικό
Περιφερικό αίμα σε στείρο σωληνάριο γενικής με αντιπηκτικό EDTA.Εργαστηριακή διερεύνηση
Επειδή η ποσότητα της προθρομβίνης στο πλάσμα εμφανίζει μεγάλες φυσιολογικές διακυμάνσεις, η μέτρηση της δε θεωρείται αρκετά ευαίσθητη μέθοδος για την ανίχνευση της μετάλλαξης 20210Α. Έτσι, προτιμούνται τα γενετικά τεστ, τα οποία βασίζονται στη μέθοδο PCR, με ενίσχυση τμήματος κοντά στην 3΄αμετάφραστη περιοχή του γονιδίου της προθρομβίνης, που περιλαμβάνει και τον 20210Α πολυμορφισμό.Αποτελέσματα
Τα αποτελέσματα είναι έτοιμα σε 5 εργάσιμες ημέρες. -
Ανίχνευση των πολυμορφισμών του γονιδίου του ενεργοποιητή του πλασμινογόνου
PAI-1 -
Ενδείξεις για Μοριακό Έλεγχο Θρομβοφιλίας
Ενδείξεις για Μοριακό Έλεγχο Θρομβοφιλίας
- Φλεβική θρόμβωση σε ηλικία < 50 ετών
- Γυναίκες πριν πάρουν αντισυλληπτικά ή ορμονικά σκευάσματα
- Ασθενείς ανεξαρτήτου ηλικίας με ιστορικό θρόμβωσης καθώς και τα μέλη της οικογένειάς τους
- Μέλη οικογένειας, όπου ανιχνεύτηκε μετάλλαξη FV Leiden ή MTHFR ή μετάλλαξη προθρομβίνης
- Ιστορικό επαναλαμβανόμενων αποβολών (EAA)
- Αποκόλληση πλακούντα
- Διάχυτη ενδοαγγειακή πήξη
- Τοξιναιμία κύησης
- Ενδομήτριος θάνατος
- Ελλειποβαρή νεογνά
- Πρόωρα νεογνά
- Σύνδρομο πολυκυστικών ωοθηκών
-
Πάνελ εξετάσεων για Θρομβοφιλία
Πάνελ εξετάσεων για Θρομβοφιλία
- PT
- PTT
- Πρωτείνη C
- Πρωτείνη S
- Αντιθρομβίνη ΙΙΙ
- Factor VIII
- Factor ΙΧ
- Ανίχνευση μετάλλαξης V-Leiden
- Ανίχνευση μετάλλαξης ομοκυστείνης MTHFR
- Ανίχνευση μετάλλαξης προθρομβίνης G20210A
- APCR
- D Dimmers
- Αντιπηκτικό του λύκου (LAC)
- Αντιφωσφολιπιδικά αντισώματα:
- - κατά καρδιολιπίνης Cl
- - φωσφατιδυλοσερίνης PS
- - φωσφατιδυλαιθανολαμίνης PE
- - φωσφατιδυλοινοσιτόλης PI
- - φωσφατιδυλοχολίνης PC
- - φωσφατοδυλογλυκερόλης PG
- - φωσφατιδικού οξέος PA